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【简答题】

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问
   
(1)一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后,分别含有__▲__个游离的磷酸基团。
(2)若对图中质粒进行改造,插入的SmaⅠ酶切位点越多,质粒的热稳定性越__▲__。
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用Srna Ⅰ切割,原因是__▲__。
(4)与只使用EcoR I相比较,使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止__▲__。
(5)为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入__▲__ 酶。
(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了__▲__。
(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因,将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体,然后在__▲__的培养基中培养,以完成目的基因表达的初步检测。

参考答案

(8分)  (1)0、2 
(2)高 
(3)SmAⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 
(4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 
(5)DNA连接 
(6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞 
(7)蔗糖为唯一含碳营养物质

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